Fast Filter Accossory와 Ion Probe를 사용한 칼슘 이온의 농도 변화 확인
 
 
 

result

Wave Scan mode를 이용하여 측정한 칼슘 이온 농도에 따른 FURA-2, INDO-1의 스펙트럼은 그림 6 (a), (b)와 같다. 농도에 따라서 파장 변화가 점진적으로 일어나는 것을 확인 할 수 있다.


그림 5. Calcium Ion의 농도에 따른 스펙트럼 변화
(FURA-2 (a), INDO-1 (b))

다음으로 칼슘 이온 농도에 따른 Intensity와 Ratio의 시간에 따른 추적데이터를 살펴보자. 칼슘 이온에 따른 농도 정량은 다음 Grynkiewicz Equation을 따른다.

[Ca2+] : 시간에 따른 칼슘 이온의 농도
Kd : 용매와 킬레이트 시약간의 해리 상수
R : 시간에 따른 각 파장의 형광 값의 비
Rmin : 최소 형광 값의 비 (최적 Free 상태에서의 비율)
Rmax : 최대 형광 값의 비 (최적 Bound 상태에서의 비율)
Sfb (Sf2/Sb2) : Rmin상태와 Rmax에서의 Free 고유 파장의 형광 세기 비 (FURA-2 : 380nm, INDO-1 480nm)


그림 6. FURA-2 시약의 Calcium 이온 농도 변화에 따른
형광 세기 (a)와 비율 (b), 농도 변화 (c) 확인

CONCLUSION

본 연구에서는 ㈜신코의 형광 분광광도계 FS-2와 Fast Filter 액세서리를 이용하여 칼슘 이온 농도에 따른 이온 형광 표지자의 스펙트럼 변화를 확인하였다. 또한 칼슘 이온 변화 실험을 통해 두 고유 파장에서의 형광 세기가 역전 됨을 확인 할 수 있었고, 이를 기반으로 농도 변화도 실시간으로 직접 확인 할 수 있었다.


그림 7. INDO-1 시약의 Calcium 이온 변화에 따른
형광 세기 (a)와 비율 (b), 농도 변화 (c) 확인

REFERENCE

1. Nicole Kresge, et al., The Jounal of Biological Chmistry, 281, 29 (2006).
2. G. Grynkiewicz, et al., The Jounal of Biological Chmistry, 260, 3440 (1985).
3. Neher E., Neuropharmacology, 1423, 34 (1995).