1. Fluorescence Spectrometer (FS-2)
2. Donor Oligonucleodtide
5’ - (Alexa 488) - ACCGTGAGCA - 3’
3. Acceptor Oligonucleodtide
5’ - (Alexa 532) - TGCTCACGGT - 3’
4. Tris-EDTA Buffer Solution (pH 8.0)
5. NaCl (ACS reagent, ≥99.0%)
6. 10ml Plastic Tubes
7. Fluorescence cell
| 1. |
2개의 plastic tube에 Tris-EDTA buffer (pH 8.0)를 10ml씩 넣은 후, NaCl을 각각 172mM (donor 용), 190mM (acceptor 용)이 되도록 제조한다. |
| 2. |
Donor, acceptor oligonucleotide를 각각의 제조한 buffer에 녹여 900nM로 제조한다. |
| 3. |
Donor 시약과 acceptor 시약의 흡수, 방출 스펙트럼을 Wave Scan mode로 측정한다. (그림 3) |
| 4. |
FRET 발생 전 데이터 비교를 위해 Excitation wavelength를 492nm로 고정하고 donor 시약과 acceptor 시약을 Emission Scan 한다. |
| 5. |
Donor 시약과 acceptor 시약을 혼합하고 상온에서 5분간 항온 처리한 뒤, 같은 조건으로 Emission Scan한다. |
그림 3. Wave Scan mode 측정 조건
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