1. Fluorescence Spectrometer (FS-2)
2. Peltier Control Module, Single Cell Holder
3. Donor Oligonucleodtide
5’ - (Alexa 488) - ACCGTGAGCA - 3’
4. Acceptor Oligonucleodtide
5’ - (Alexa 532) - TGCTCACGGT - 3’
5. Tris-EDTA Buffer Solution (pH 8.0)
6. NaCl (ACS reagent, ≥99.0%)
7. 10ml Plastic Tubes
8. Fluorescence cell
| 1. |
2개의 plastic tube에 Tris-EDTA buffer (pH 8.0)를 10ml씩 넣은 후, NaCl을 각각 172mM (donor 용), 190mM (acceptor 용)이 되도록 제조한다. |
| 2. |
Donor, acceptor oligonucleotide를 각각의 제조한 buffer에 녹여 900nM로 제조한다. |
| 3. |
제조한 Donor 시약과 acceptor 시약을 혼합한 후, 상온에서 5분간 항온 처리한다. |
| 4. |
Peltier System을 FS-2에 장착한다. |
| 5. |
FluoroMaster Plus Software의 Thermal mode를 실행 시킨 후, 설정 값을 입력한다. (그림 3) |
| 6. |
TM 값을 구하기 위해 측정이 끝난 후, Donor를 기준으로 각 측정 지점의 기울기 값을 소프트웨어 (Excel®, Origin® 등)를 이용하여 계산하여 확인한다. |
그림 3. Thermal mode 측정 조건
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